Gly-Pro-AMC是用于檢測(cè)二肽酰多肽酶IV (DPPIV)的高靈敏度熒光底物，一種絲氨酸蛋白酶，能夠從倒數(shù)第二位上是L-脯氨酸或者L-丙氨酸的多肽上剪切其N末端的二肽酰。DPPIV是表達(dá)于多種細(xì)胞（包括上皮細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞）表面的多功能蛋白質(zhì)。它與T細(xì)胞活化抗原CD26和腺嘌呤核苷脫氨基酶（腺苷脫氨酶）結(jié)合蛋白具有同一性，它以可溶性狀態(tài)釋放于血漿中。CD26/DPPIV的底物包括多種含有脯氨酸的多肽，例如生長因子、趨化因子、神經(jīng)肽和血管活性肽。DPPIV參與免疫調(diào)控，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞凋亡，并且在腫瘤的發(fā)展中發(fā)揮重要作用。重要的是，DPPIV是II型糖尿病的治療靶點(diǎn)，由于其作為血清蛋白酶，能夠剪切多肽胰高血糖素家族中腸降血糖素荷爾蒙，以此調(diào)節(jié)體內(nèi)葡糖糖的穩(wěn)定。研究顯示一種DPPIV抑制劑可以增強(qiáng)葡糖糖衰減的耐受力。用帶有Gly-Pro-AMC的DPPIV檢測(cè)是一種簡單、快速，靈活的檢測(cè)法，是理想的高通量篩選方法。與DPPIV檢測(cè)法相比，這種檢測(cè)法增強(qiáng)了檢測(cè)靈敏度，使研究者可以用更少的酶，同時(shí)獲得恰當(dāng)?shù)腪值。這種單一性的酶偶聯(lián)形式使用非常方便，只需要在檢測(cè)樣品中添加一種單一的試劑；在20inm內(nèi)可以獲得最大感光值，并且其單一產(chǎn)物非常穩(wěn)定。

溶液制備 

1.儲(chǔ)備溶液

所有未使用的儲(chǔ)備溶液應(yīng)分為一次性使用的等分試樣，并在制備后儲(chǔ)存在-20°C下。 避免重復(fù)凍融循環(huán)。
1.1 Gly-Pro-AMC：
在DMSO中制成10至25 mM的Gly-Pro-AMC儲(chǔ)備溶液，避光。 注意：儲(chǔ)備溶液應(yīng)及時(shí)使用； 應(yīng)將所有未使用的溶液等分，并在-20℃冷凍。注意：避免重復(fù)凍融循環(huán)，并避免光照。 

2.工作溶液

Gly-Pro-AMC：
取出一個(gè)小瓶，并用您選擇的測(cè)定緩沖液（例如50 mM Tris-HCl，pH 7.5，1.0 mM DTT）稀釋儲(chǔ)備溶液，制成50至100 μM測(cè)定溶液。

樣品操作及分析

1.將等體積的DPPIV標(biāo)準(zhǔn)品或樣品與測(cè)定溶液混合，并在室溫下孵育至少1小時(shí)。

2.在Ex / Em = 380/500 nm處監(jiān)測(cè)熒光增加。